一、原代細胞分離培養(yǎng)介紹

原代細胞(primary cell)是指從生物體獲取細胞直接培養(yǎng)。常用的原代細胞分離培養(yǎng)方法有組織塊培養(yǎng)和分散組織培養(yǎng)。

組織塊培養(yǎng)：是將剪碎的組織塊直接移植在培養(yǎng)瓶壁上，加入培養(yǎng)基后進行培養(yǎng)。

組織塊培養(yǎng)法是常用的、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。將組織塊剪切成小塊后，接種于培養(yǎng)瓶，組織小塊貼壁24h或更長時間后，細胞就從組織四周游出。但由于在反復剪切和接種過程中對組織塊的損傷，并不是每個小塊都能長出細胞。用于組織塊培養(yǎng)的培養(yǎng)瓶可根據(jù)不同細胞生長的需要作適當處理，如：預先涂以鼠尾膠原薄層，以利于上皮樣細胞等的生長。

分散組織培養(yǎng)：是將組織塊從機體中取出離散成單個細胞，置于合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細胞得以生存、生長和繁殖。分散組織培養(yǎng)也是常用的一種原代細胞培養(yǎng)方法，通常用機械法或化學法將組織塊分散為單細胞。如欲從胎兒或新生兒的組織分離到活性較好的游離細胞，經典的方法是用蛋白水解酶(如胰蛋白酶和膠原酶)消化細胞間的結合物，或用金屬離子螯合劑(如EDTA)除去細胞互相粘著所依賴的Ca2+，再經機械輕度振蕩，使之成為單細胞。

二、注意事項

1. 取材的組織要盡快培養(yǎng)。如若不能及時培養(yǎng)，可將組織浸泡于培養(yǎng)液內，放置于冰浴或4℃冰箱中，如果組織塊很大，應切成1cm3以下的小塊再低溫保存，但時間不能超過24h。

2. 從消化道、周圍有壞死組織等污染因素存在的區(qū)域取材，可用含500～1000u/ml的青-鏈霉素BSS液漂洗5～10min，或用10%達克寧注射液沖洗浸泡10min再作培養(yǎng)。

3. 組織塊不易貼壁，可預先在瓶壁涂薄層血清、胎汁或鼠尾膠原等。

4. 原代培養(yǎng)的1～2d內要特別注意觀察是否有細菌、真菌、霉菌的污染，一旦發(fā)現(xiàn)，要及時清除。

原代細胞在細胞學研究、遺傳學研究、腫瘤研究、藥物篩選、細胞移植、類器官培養(yǎng)等眾多研究領域備受歡迎，且原代細胞在生物醫(yī)藥領域的應用市場前景廣闊。

三、細胞生物學檢測

• 2D細胞培養(yǎng)和觀察
• 3D細胞培養(yǎng)和觀察
• 原代細胞分離/培養(yǎng)/鑒定
  
• 細胞增殖/毒性檢測（MTT 法/CCK8 法）
• 細胞凋亡檢測（AnnexinV FITC/PI雙染流式法/Tunel法）
• 細胞周期檢測（PI染料標記流式法）
• 細胞遷移/侵襲檢測（劃痕法/Transwell法）
• 流式細胞分選（流式細胞術）
• 細胞免疫熒光檢測
• 小管形成實驗（tube formation，體外血管生成實驗）

• 細胞克隆形成實驗

• 細胞外泌體分離與鑒定
• 慢病毒包裝及穩(wěn)轉株篩選
• 電生理檢測
• 個性化細胞實驗（藥物篩選等）
  細胞模型已經于人類疾病研究和治療藥物的篩選領域中得到廣泛應用。我司可根據(jù)客戶的具體方案提供多種細胞模型的構建及相應的細胞生物學功能檢測。

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五、公司簡介  

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